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最好的中秋节礼物
[版面:生物学][首篇作者:midwestPstD] , 2016年09月15日15:08:35 ,10653次阅读,59次回复
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midwestPstD
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发信人: midwestPstD (中西部博士后), 信区: Biology
标  题: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:08:35 2016, 美东)

呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。

这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。

这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
方法没兴趣,意见一堆;作方法的reviewer对突变子本身没兴趣,对方法上所有改进作
用的思路都感兴趣,但对我们没有和其它方法进行试验比较很失望,觉得作为方法的文
章发表有欠缺。。。

老板说:你也好多年没发第一作者的文章了(上次发是2008年,JBC,还好被Faculty
1000选中了),今天回家开瓶酒喝吧。

不错不错,了结了这个,就可以全心全意接一个马上毕业学生的project了。学生这个
project刚发了Nature子刊,看能不能搞个grant。近十年实验室的所有grant都有我的
影子。一个RO1的renewal全靠我筛出来的compound;一个R21在第一次申请失败后我插进
去补数据,第二轮成功;一个DOD的grant虽然是学生为主,但筛选的第二轮的方法就是
我花了几个月来为他develop的;最新的RO1 renewal也是把我上面的mutant cell
lines的数据加进去,并且根据我的方法再提出新的idea后,第三轮才拿下来的。学生
的这个project写了一个proposal,可惜没拿到钱。希望我接手后,文章也发表了,能和
过去十年一样,有奇迹发生。我还需要5-6年的饭碗,把儿子的大学学费解决呢。

我的CRISPR/HDR方法可能对大多数人没有帮助。我是利用mutant的一个特点来筛选的。
我用两个guide sequences把我的基因功能搞掉(我的细胞靠这个基因才能生长), 先
筛transfected细胞,再用mutant的特性来筛选我要的克隆,成功率很高。挑选出来的
克隆,70%是带mutation的。大约1/4是两个copy都按我设计的突变,1/2是有一个copy
按我设计的突变,另外1/4原因不明。因NPG问我们有没有兴趣把方法发表在Scientific
Data上,细节我等老板决定是不是发Scientific Data后,再考虑是不是post到这里。

祝各位同行中秋快乐!
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scottli
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发信人: scottli (scott), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:17:22 2016, 美东)

恭喜!中秋快乐?

【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
: 方法没兴趣,意见一堆;作方法的reviewer对突变子本身没兴趣,对方法上所有改进作
: ...................




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☆ 发自 iPhone 买买提 1.23.01
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maxdna
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发信人: maxdna (sunset heaven), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:22:56 2016, 美东)


恭喜midwestPstD老师!中秋节快乐!

听说过支原体污染,细菌污染,真菌污染,衣原体污染还是第一次听说。


【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
: 方法没兴趣,意见一堆;作方法的reviewer对突变子本身没兴趣,对方法上所有改进作
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midwestPstD
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发信人: midwestPstD (中西部博士后), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:26:49 2016, 美东)

谢谢!

【 在 scottli (scott) 的大作中提到: 】
: 恭喜!中秋快乐?



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midwestPstD
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发信人: midwestPstD (中西部博士后), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:28:00 2016, 美东)

哈哈,你可能是对的。我也不记得中文了-mycoplasma,就是支原体吧。:(。

多谢!

【 在 maxdna (sunset heaven) 的大作中提到: 】
: 恭喜midwestPstD老师!中秋节快乐!
: 听说过支原体污染,细菌污染,真菌污染,衣原体污染还是第一次听说。



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GoooG
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发信人: GoooG (pumpkin), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:34:17 2016, 美东)

congrats.
【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
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dimorphism
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发信人: dimorphism (雷小阿伦), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:37:27 2016, 美东)

congrats.
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crispr2016
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发信人: crispr2016 (), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:51:56 2016, 美东)

恭喜恭喜啊 什么时候在线呢 一定要拜读一下
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superdonkey
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发信人: superdonkey (山东驴嗷嗷叫), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 15:55:50 2016, 美东)

恭喜恭喜,发paper绝对值得庆贺
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miRNAdigger
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发信人: miRNAdigger (miRNA.digger), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 16:37:53 2016, 美东)

恭喜!
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Shangxuanyue
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发信人: Shangxuanyue (上玄月), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 16:43:10 2016, 美东)

你这完全是走钢丝似的成功,假如没有compound,假如grant得不到,你可能就失业了
。其实认真做科学就是你这种情况,出好结果全凭运气。那种做课题成功效率极其高的
往往都是造假。只是这个社会对科学家太不公平了,没有任何保障。你可以写小说了。
hcy除了和本科生谈心,玩古琴,能有这些体会吗?

【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
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coinbycoin
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发信人: coinbycoin (eagles), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 17:25:44 2016, 美东)

赞!

【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
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evans
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发信人: evans (evans), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 19:06:10 2016, 美东)

难得有如此之热情,蝼蚁撼树 一定要有信心
【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
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teekeetk
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发信人: teekeetk (teekeetk), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 19:16:28 2016, 美东)

恭喜恭喜,赶快让我沾点喜气
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laodao2007
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发信人: laodao2007 (laodao), 信区: Biology
标  题: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 19:26:32 2016, 美东)

真心祝福楼主,这是楼主对科研多年的积累的结果。一般来讲,新的薄厚还真心没有到
这个层次。实验室招薄厚,十分之一人的能到楼主这个层次就算是实验室烧高香了。

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blueyes
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发信人: blueyes (每天爱小宝多一些), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 20:28:38 2016, 美东)

恭喜,正能量
【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
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Oncogene
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发信人: Oncogene (问天), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 20:37:27 2016, 美东)

恭喜,恭喜!

【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
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benxiong811
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发信人: benxiong811 (ben), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 21:43:36 2016, 美东)

恭喜恭喜,都是你努力的回报啊,这下放心啦,也可以抽空多钓鱼了:)

【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
: 几个月过去了。设计时把我几十年的分子生物学和tissue culture经验,能想到的可能
: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
: 东西。在显微镜下找得头昏眼花,没结果,给老板打个招呼正准备放弃呢,扔细胞培养
: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
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xigua2015
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发信人: xigua2015 (天时地利人和), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 22:08:41 2016, 美东)

congrats!



【 在 midwestPstD (中西部博士后) 的大作中提到: 】
: 呵呵,今天收到通知,送Nature子刊的文章终于接受了。
: 这次很不顺。从试验设计开始老板就认为CRISPR/HDR成功率低不让作,到我说服他就好
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: 改进成功率的方式都加进去了。几个月后,终于作完了第一轮,还差点就没拿到我要的
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: 皿的那一瞬间,突然想到举起来对着日光灯肉眼看了一下,一个克隆就在培养皿的最边
: 沿--最后证明这个克隆是一个基因的两个copy都按我设计的突变了。。。。
: 这一年来,又是衣原体污染(实验室的host cell line本身就污染了!),又是克隆不
: 纯,搞得好头疼。最后稿子送出去了,作science这边的reviewer对突变子有兴趣,对
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thinkit
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发信人: thinkit (THINK), 信区: Biology
标  题: Re: 最好的中秋节礼物
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 15 23:05:50 2016, 美东)

恭喜! 沾点喜气! 祝中秋快乐!
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